冠状病毒如何检查?
最近总是有人询问关于病毒的问题,这里整理了一份常见问答; 提问:新型肺炎血清检测方法有哪些?分别有什么区别?
回答:不请自来~ 关于这个新型肺炎的血清学检测,其实以前也是多次发生疫情的时候用到的方法之一,比如03年的非典时期,当时就采集了上百名疑似病例的血清,做间接免疫荧光抗体法(IFA)来检测,结果发现有24例阳性。 当然这种方法也有弱点,就是它只能发现既往感染的病人,而不能探测当前是否感染,因为血清中的特异性抗体需要一定时间才能产生。另外由于各种抗体出现和消失的时间存在个体差异,所以检测结果受到很多因素影响。
不过虽然这个方法不能检测到近期感染的病例,但它有一个优点,那就是可以监测疫情的发展变化,如果连续测量多个时间点,甚至可以反映疫情的拐点[1]! 所以这次武汉新型冠状病毒的疫情中,也使用了该方法来对疫情进行预测。
那除了这个方法之外,其实还有许多其他的方法可以用来检测新型冠状病毒, 今天就来介绍其中一种——实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 可能看到这个名字大家有点懵,让我慢慢道来。首先实时是相对于传统的聚合酶链式反应(PCRR)而言的,是在反应体系中加入荧光素标记的特定核苷酸衍生物,在 PCR 过程中,其与互补 DNA(cDNA)序列结合,通过检测荧光强度的变化,进而确定是否扩增出目标片段。而 qPCR 是 quantitative PCRR 的简称,也就是定量 PCR的意思,可以通过计算得出待测样品中靶基因的浓度。 如果要用 RT-qPCR 这个技术来检测新型冠状病毒,首先就需要有对应的试剂,而目前市面上的 RT-qPCR 试剂盒有很多,以检测新型冠状病毒为例的有如下几种: 不同公司所开发的试剂盒所用的引物和探针有所不同,但都是为了检测同一物种——新型冠状病毒。接下来简单介绍一下这四种试剂盒。
1. 乐城研发的全场景 RNA 检测套装(新型冠状病毒核酸 RT-qPCR 检测) 这是一款全面上市的新产品,适用于临床样本中新型冠状病毒的 RNA 水平检测,采用 RT-qPCR 技术,可同时检测 5 种人类冠状病毒。并且已经通过了国家药监局审核,具备医疗器械资质。 试剂盒中含有 A、B 两个组份。A 组包括试剂一(RNase P),试剂二(dNTPs),缓冲液等;B 组包含上下游引物和内标探针。 根据说明书操作,将 A 组和 B 组分别配置成溶液,然后混合均匀后,取少量进行 RT-PCR 反应,最后通过 Ct值来计算拷贝数。
2. 圣湘生物的呼吸道病原体多重核酸检测试剂盒(RNA 荧光 PCR 法) 这是一款多重核酸检测试剂盒,适合于一个采样点同时检测多种呼吸道病原体,如新型冠状病毒、甲型流感、乙型流感病毒等,通过一次采样,一次检测,实现同时对多种呼吸道病原体的快速筛查。 这是一种 RNA 荧光 PCR 法,原理同上,通过将提取的病毒RNA 用 RT-PCR 方式进行扩增,再通过荧光信号的检测来获得病毒的含量。
3. 北京万泰的生物靶向注射剂(新型冠状病毒 2019-nCoV 核酸检测试剂盒) 这是一款专门针对新型冠状病毒的核酸检测盒,采用 RT-polymerase chain reaction (RT-PCR) 技术,能实现对新型冠状病毒的实时检测。 在进行测试之前,需要先通过核酸提取的方式从样本中提取出所需的病毒 RNA 分子,然后再进行聚合酶链式反应,最终得到待测病毒的 cDNA 分子。通过荧光染料标记的特异性探针与 cDNA 分子杂交,再经过成像系统,便可观察到荧光信号,从而判断是否存在新冠病毒。
4. 上海伯豪的生物试剂(新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(RT-LAMP)) LAMP 全称是 loop-mediated isothermal amplification。简单来说就是在恒温下,利用循环酶促反应扩增特异 DNA 序列,是一种新型的核酸扩增技术。 伯豪生物的这个检测试剂盒正是运用了这个技术,只需 4 个小时就可以完成反应,并具有高敏感性,可以检测出极低浓度的病原微生物。 这个试剂盒同样需要通过 RNA 提纯得到病毒 RNA 为模板,再进行扩增,最终通过观察荧光强度来判断结果。
以上就是为大家介绍的有关新型冠状病毒血清学和 RNA 检测的相关知识,希望能对大家有所帮助~